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熒光顯微鏡濾光片簡介

2024-09-09 派大莘

熒光顯微鏡濾光片是熒光顯微鏡系統中的重要組件,其主要功能是選擇性地透過或反射激發光和熒光光之間的波長差異。這些濾光片可以顯著提高圖像的對比度和清晰度,使得研究者能夠更準確地觀察和分析樣品。


 熒光顯微鏡濾光片簡介


無論用什么顯微鏡,要得到準確的實驗結果和實驗數據,都離不開熒光染料正確設置激發和發射波長,熒光染料所需的激發光和釋放的熒光都是特定波長的,所以需要利用各種濾色片來選擇性的透過某種特定波長的光來實現熒光觀察。否則就會出現激發不了,或者激發了卻看不到或串色的現象。所以選擇合適的濾色片至關重要!


 熒光顯微鏡


顯微鏡觀察的熒光一般包括紫外、紫藍綠色光兩種色光,常見的濾光片類型為長波濾光片或帶通濾光片,在熒光顯微鏡的光學組件中,涉及光學鏡片一般分為激發濾光片、分色鏡(也叫二向色鏡)、發射濾光片,激發濾光片負責可通過的激發熒光波長激發,分色鏡負責精確傳遞小范圍顏色光同時反射激發光,一般而言,激發光波長短于發射光波長,反射濾光片通過反射光阻擋其他雜散光和激發光的反射光,進而透射到人眼。

 熒光顯微鏡光學系統

按功能分:

激發濾光片(Excitation Filter):選擇性地透過激發光的波長范圍,通常是藍色或紫色。其作用是激發樣品中的熒光染料,使其產生熒光信號。常見的激發濾光片波長范圍在400-500 nm之間。

二向色鏡(Dichroic Mirror):選擇性地反射激發光的波長,同時透過樣品發出的熒光光信號。二向色鏡濾光片的波長范圍通常在500-550 nm之間。

發射濾光片(Emission Filter):選擇性地透過樣品發出的熒光光信號,同時阻擋非特異性的背景熒光。發射濾光片的波長范圍取決于所使用的熒光染料。

 熒光顯微鏡光學系統工作原理

 

熒光顯微鏡中各個波段的所需濾光片的發射波長和激發波長參考

品名

紫外激發組

藍色激發組

CFP激發組

YFP激發組

綠色激發組

TexasRed激發組

激發片

360/50nm

475/35nm

442/20nm

490/20nm

530/40nm

560/30nm

分光片

400nm

500nm

460nm

510nm

560nm

590nm

發射片

450/60nm

530/50nm

480/30nm

530/25nm

605/60nm

630/70nm

 

 

熒光顯微鏡濾光片通常可以按照不同的分類方式進行劃分:

按使用目的分:

通用型:適用于觀察細胞、細菌、病毒等一般生物樣品。

專用型:針對特定研究需求設計,如研究生物大分子結構。

科研用:具備更高的精度和靈敏度,適用于深入的科學研究。

 

按材料分:

石英玻璃:具有優異的光學性能和穩定性。

硅酸鹽玻璃:成本較低,但光學性能略遜于石英玻璃。

氟化物玻璃:在某些特定波長范圍內具有出色的透過性。

 

選擇與應用

在選擇熒光顯微鏡濾光片時,需要考慮以下幾個因素:

熒光染料的發射波長:濾光片的波長范圍應與熒光染料的發射波長相匹配,以確保最佳的熒光信號檢測效果。

研究目的:不同的研究目的可能需要不同類型的濾光片組合。例如,對于高靈敏度的檢測任務,可能需要選擇具有更高截止深度和更窄帶寬的濾光片。

顯微鏡類型:不同類型的熒光顯微鏡(如透射式、落射式等)可能需要不同的濾光片配置。

在實際應用中,需要根據具體情況合理選擇和搭配濾光片。例如,在透射熒光顯微鏡中,濾光片的順序通常為吸熱濾光片、激發濾光片組合、被檢標本和阻擋濾光片。而在落射熒光顯微鏡中,則需要在激發濾光片和被檢標本之間加入色光分離反射濾光片。

 

價格與供應

熒光顯微鏡濾光片的價格因品牌、型號、規格和供應商而異。市場上存在多種品牌和型號的濾光片供選擇,價格從幾元到幾百元不等。在購買時,建議根據實際需求和預算進行選擇,并選擇信譽良好的供應商進行采購。

綜上所述,熒光顯微鏡濾光片是熒光顯微鏡系統中不可或缺的重要組件。通過合理選擇和搭配濾光片,可以顯著提高熒光顯微鏡的成像效果和研究效率。


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